發布時間：2025-12-19 15:02:16 人氣：5468
一個標準的四區PCR實驗室，其壓力應從最潔凈的區域向最可能產生污染的區域逐級降低。
理想的壓力梯度（以相對室外大氣壓為參考）：
試劑準備區（+）> 標本制備區（-）> 擴增區（--）> 產物分析區（---）
更直觀的表述（各區之間的相對壓差）：
試劑準備區（最潔凈的正壓區）： 對相鄰區域保持最大正壓（通常為+15Pa至+20Pa以上），防止外部空氣及氣溶膠流入。
標本制備區： 對試劑準備區為負壓，但對擴增區保持正壓。它是一個關鍵緩沖區。
擴增區： 壓力應低于標本制備區，但高于產物分析區。
產物分析區（污染風險最高區）： 對整個實驗室內部保持最大負壓（通常為-10Pa至-15Pa以下），確保所有可能含擴增產物的氣溶膠被牢牢鎖在該區域內，并通過獨立排風系統排出。
壓力遞降順序： 試劑準備區 → 標本制備區 → 擴增區 → 產物分析區
| 功能區 | 相對壓要求（相對于相鄰潔凈度較低區域） | 壓力控制目的與原理 |
|---|---|---|
| 試劑準備區 | 正壓最大值（通常 +15 ~ +20 Pa 或更高） | 保護試劑，防止污染源進入。 這里是配制引物、酶等“干凈”試劑的地方，必須嚴防任何含有模板DNA或擴增產物的氣溶膠流入。 |
| 標本制備區 | 對試劑區為負壓，對擴增區為正壓 | 核心防護區。 此處進行樣本處理、核酸提取，是模板DNA氣溶膠的主要產生源。保持相對負壓可防止模板泄露至試劑區；保持對擴增區的正壓，可防止擴增產物倒流。 |
| 擴增區 | 對制備區為負壓，對分析區為正壓 | 關鍵隔離區。 此處進行PCR擴增，產生海量的目標DNA擴增產物（amplicons），是實驗室最強大的污染源。必須確保產物不會逆向擴散至前區。 |
| 產物分析區 | 負壓最大值（通常 -10 ~ -15 Pa 或更低） | 污染物的“陷阱”和出口。 此處進行電泳、測序等打開反應管蓋的操作，是擴增產物氣溶膠暴露風險最高的區域。保持最大負壓，確保所有污染物只能通過排風系統（經高效過濾）安全排出，絕不回流。 |
僅有設計是不夠的，必須通過可靠的工程手段來實現和維護。
緩沖間的設置： 相鄰兩區之間必須設置緩沖間。緩沖間的壓力應介于其連接的兩個主功能區之間。例如，試劑準備區與標本制備區之間的緩沖間，其壓力應低于試劑區，但高于標本區。這形成了雙重氣鎖，極大地增強了壓差穩定性。
機械通風聯鎖： 應采用定風量送風系統和變風量排風系統的組合，或使用文丘里閥等精密風量控制裝置。通過自動控制系統實時監測壓差，動態調節排風量或送風量以維持設定值。
獨立的排風系統： 擴增區和產物分析區必須設置獨立的、全排的排風系統，且排風口不應與其他區域共用風管。排風建議經過高效過濾器（HEPA） 處理，特別是對于生物安全要求高的實驗室。
嚴密的氣密結構：
所有隔墻、吊頂必須密封，特別是穿墻管線的周圍。
門必須具有良好的氣密性，并安裝自動閉門器。
傳遞窗應采用互鎖式，且兩側不能同時打開。
可視化監控： 在每個主功能區和緩沖間的門上安裝數字式壓差計/壓差表，以便工作人員實時觀察壓差狀態。壓差數據最好能接入中央監控系統并設置報警。
絕對壓力值 vs 相對壓差： 更重要的是各區之間的壓力梯度（相對壓差），而不是每個房間對室外大氣的絕對壓力值。只要梯度正確且穩定（一般相鄰房間≥5Pa即可有效），系統就是安全的。
開門的影響： 設計時必須考慮開門瞬間的氣流擾動。穩定的壓差梯度和緩沖間的設置，就是為了在短暫開門時，仍能通過氣流方向防止污染擴散。
規范依據： 設計必須符合中國《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則》及《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》等文件的基本要求。
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